PCR新手指南：PCR現(xiàn)在又?jǐn)U增不出來了怎么辦？

這個(gè)問題是常見的問題，就是一個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)一直都做得很好，停一段時(shí)間后再做就不行了。一通亂找原因后還是不行，很痛苦！

找問題要從大到小：

1、PCR擴(kuò)增體系問題
用其他正在進(jìn)行的且擴(kuò)增正常的模板和引物證明PCR擴(kuò)增體系沒有問題，即PCR反應(yīng)混合物、水、取液器、PCR儀、操作等都是好的（陽(yáng)性對(duì)照）

2、引物問題
用以前擴(kuò)增產(chǎn)物做模板（稀釋50倍），證明引物沒有問題

3、只是模板問題了。
因?yàn)闃颖窘到獾目赡苄员纫锝到獾目赡苄愿叩枚?。也可能是樣本中的抑制物過多（新鮮時(shí)沒有溶出來）。

不要靠運(yùn)氣找問題，先做條很重要。亂找問題常常讓人失去信心的。